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                Calcein釋放實(shí)驗檢測細胞毒性T淋巴細胞活性實(shí)驗方法

                發(fā)布時(shí)間: 2021-11-12  點(diǎn)擊次數: 1281次
                實(shí)驗步驟


                1. 靶細胞的標記 
                用5μmol/L Calcein AM 37℃ 水浴30min進(jìn)行標記。
                 
                2. 效-靶細胞作用 
                殺傷實(shí)驗在圓底96孔培養板中進(jìn)行。按E/T比例:50/1、25/1、12.5/1、6.25/1、3.13/1、1.56/1加入梯度稀釋的效應細胞與標記好的靶細胞各l00μl/孔,每個(gè)比例3復孔。同時(shí)設自發(fā)釋放組3復孔,*釋放組3復孔。效-靶細胞作用96孔培養板在37℃ 5% CO2培養箱孵育4h后,3000r/min離心5min,將上清移入新的孔中。
                 
                3. 熒光檢測 
                用熒光測量?jì)x檢測上清的熒光值(FI),激發(fā)光為485nm,發(fā)射光為538nm。
                 
                4. 結果計算
                殺傷率(%)=■×100%



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