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磁性活化細胞分選法（MACS）

發(fā)布時(shí)間： 2021-11-15　　點(diǎn)擊次數： 1323次

材料與儀器
緩沖液
磁性細胞分離器分離柱適配器陽(yáng)性選擇柱符合收集容積的收集器磁性微珠
步驟
一、標記

1. 標準方法分離外周血單核細胞或經(jīng)酶消化法及其他方法制備的細胞懸液。

2. 用 Ficoll-Paque 去除死細胞。

3. 用 30 μm 尼龍網(wǎng)篩或濾膜（Myltenyi，# 414: 07）過(guò)濾細胞去除細胞團塊（濾膜應用前用緩沖液濕潤）。

4. 緩沖液（D-PBS，pH 7.2 ，含 0.5 % BSA 和 2 mmol/L EDTA）洗滌細胞，離心。

5. 重新懸浮離心細胞，每 107 個(gè)細胞懸浮于 80 μl 緩沖液（80 μl 為最少*，即使總細胞數低于 107 個(gè)）。

6. 按每 107 個(gè)細胞加微珠標記液 20 μl。

7. 混勻，6~12℃ 孵育 15 min (對于更少的細胞，用同樣體積的微珠標記液）。

8. 加入 10~20 倍于標記液體積的緩沖液稀釋細胞。

9. 300 g 離心 10 min。

10. 去上清，按每 108 個(gè)細胞加緩沖液 500 μl 重新懸浮結合了微珠的細胞。

二、陽(yáng)性磁性分離

11. 將分離柱放入 MACS 分離器（MiniMACS、MidiMACS、VarioMMMACS，或 SuperMACS（Miltenyi））的磁性區。

12. 洗柱：MS＋/ RS＋ 500 μl； LS＋/ VS＋ 3 ml。

13. 將細胞懸液加人分離柱中：MS＋/ RS＋ 500~1000 μl； LS＋/ VS＋ 1~10 ml。

14. 讓陰性細胞流過(guò)分離柱。

15. 用緩沖液淋洗柱子： MS＋/ RS＋ 3×500 μl； LS＋/ VS＋ 3×3 ml。

16. 將分離柱從分離器中取出放置在收集管上。

17. 用吸管加適量緩沖液于柱中（MS＋/ RS＋ 1 ml； LS＋/ VS＋ 5 ml），推動(dòng)針管式活塞洗脫陽(yáng)性標記細胞。

18. 細胞計數，用生長(cháng)培養基調整濃度。

(a)原代培養調整為1×105~1×106 /ml，接種于培養瓶中；

(b)克隆培養調整為 10~1000 /ml，接種于培養皿。

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