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                從海膽和沙幣等無(wú)脊椎動(dòng)物系統獲取配子的實(shí)驗方法

                發(fā)布時(shí)間: 2021-11-16  點(diǎn)擊次數: 1251次

                材料與儀器

                海膽和沙幣
                KCl 溶液 3-氨基-1 2 4-三唑
                巴斯德吸管 Nytex 濾器

                步驟

                一、海膽和沙幣體腔內注射 0.5 mol/L 的 KCl

                1. 制備 0.5 mol/L 的 KCl 溶液。

                2. 用海水沖洗一下動(dòng)物以去掉顆粒物質(zhì)。

                3. 用一個(gè) 23~26 號的針頭向動(dòng)物的口緣空腔內注射多達 500 μl 或 100 μl KCl。

                4. 用巴斯德吸管收集“干"(米青)子,并儲存于置于冰上的小塑料管中?!?br style="border: 0px solid; box-sizing: border-box; --tw-shadow:0 0 #0000; max-width: 100%; background-image: none !important; background-position: initial !important; background-size: initial !important; background-repeat: initial !important; background-attachment: initial !important; background-origin: initial !important; background-clip: initial !important; color: rgb(77, 88, 101) !important; font-size: 0.32rem !important; line-height: 0.48rem !important; margin: 0px !important;"/>
                5. 將雌性動(dòng)物在一杯海水中翻過(guò)來(lái)收集卵子。

                6. 用 Nytex 濾器洗卵子,以去掉顆粒,并使卵子吸附到濾膜上。

                7. 通過(guò)將水吸走或小心倒掉,再加入潔凈的海水將卵子洗幾遍。

                二、海膽的電刺激

                1. 將海膽反口面向上放在紙巾上。

                2. 將兩個(gè)電極一邊一個(gè)放在接近生殖管的貝殼部位,配子就會(huì )從生殖孔中釋放出來(lái)。

                3. 如果需要,在生殖管周?chē)膸讉€(gè)部位通以電流。

                4. 開(kāi)始收集卵子和(米青)子,并受精。

                三、海膽和沙幣卵的受精

                1. 制備稀釋的(米青)子懸液。

                2. 向洗過(guò)的卵中加入(米青)子。

                四、受精膜的去除

                1. 獲取卵子。

                2. 將卵子重懸于含有 1mmol/L 3-氨基-1,2,4-三唑的海水中。

                3. 受精。

                4. 當受精膜出現后,將卵子倒入直徑比卵子小幾微米的 Nytex 網(wǎng)中。


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