如何從擬南芥菜中分離葉綠體？

步驟

1. 組織勻漿

(1) 收集 10 g 葉組織，放進(jìn)一 400 ml 的燒杯中。

(2) 加入 200 ml 冰冷的研磨懸浮緩沖液。在 4℃ 的房間中，用 Polytron 勻漿器進(jìn)行 6~7 個(gè) 3 秒鐘脈沖勻漿葉組織。

研磨重懸緩沖液：

10 mmol/L EDTA

50 mmol/L HEPES-KOH，pH 8.0

0.33 mol/L 甘露醇

0.5 g/L BSA ( 無(wú)脂肪酸）

5 mmol/L 抗壞血酸鹽（用前添加）

(3) 用網(wǎng)層米拉布（Calbiochem) 過(guò)濾勻漿，濾液倒進(jìn) 4 個(gè) 50 ml 離心管中。

2. 勻漿在 8000 g（Sorvall HB-4 轉頭，7000 r/min）離心一分鐘。

3. 小心地傾去上清。加 1 ml 1x SH。用駝毛刷重新懸浮葉綠體，動(dòng)作要輕。

4. 吸 2 ml 含 35% Pecoll 的 1x SH 到一個(gè) 15 ml 的離心管中作為緩沖層：其上覆蓋重懸浮的葉綠體。13000 g（Sorvall HB-4 轉頭，10000 r/min）離心 3 分鐘。

5. 棄去上清，沉淀用 15 ml 1x SH 洗兩次，再用適當體積的 1x SH 重新懸浮。