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細胞侵襲實(shí)驗詳解剖析

發(fā)布時(shí)間： 2022-04-13　　點(diǎn)擊次數： 1541次

細胞侵襲也是與轉移密不可分的。那么今天要分享的是最為常用的細胞侵襲方法：Transwell侵襲實(shí)驗。與細胞劃痕實(shí)驗相比，Transwell相對過(guò)程復雜一些，下面就一起看看腫瘤細胞Transwell侵襲實(shí)驗吧！

細胞侵襲實(shí)驗示意圖

首先，為了對腫瘤侵襲和轉移有更加清晰的理解，我們先來(lái)了解一下，腫瘤細胞轉移的過(guò)程，主要包括以下5個(gè)過(guò)程：原位侵襲（Local invasion），腫瘤細胞內滲（Intravasation），循環(huán)系統存活（Survival in thecirculation），腫瘤細胞外滲（Extravasation），形成轉移灶（Micrometastasis formation）等。其中細胞侵襲便發(fā)生在第一步，即腫瘤細胞在原位突破基底膜，然后內滲進(jìn)入血管、淋巴管的過(guò)程，后期才開(kāi)始進(jìn)行轉移。
腫瘤細胞轉移的過(guò)程

Trans可譯為轉移，穿過(guò)，而well則為小室的意思。外形如同一個(gè)小杯子（如下圖），杯底有通透性的膜（孔徑0.1－12.0µm，細胞侵襲一般用8.0、12.0μm）。

Transwell原理簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，就是將Transwell小室放入培養板中，并將高營(yíng)養液與低營(yíng)養液用一層膜隔開(kāi)，并在膜上室鋪基質(zhì)膠，用來(lái)模擬體內細胞外基質(zhì)。腫瘤細胞放在低營(yíng)養液中，為了獲得更多的營(yíng)養吃的更飽，這些細胞需先分泌基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）將基質(zhì)膠降解，才能穿過(guò)這層膜，進(jìn)入高營(yíng)養液，最后通過(guò)計數下室的細胞量即可反映腫瘤細胞的侵襲能力。細胞Transwell實(shí)驗，可作為一種非常簡(jiǎn)便的研究腫瘤細胞遷移、侵襲以及轉移情況的方法。

實(shí)驗做完后就是最重要的結果統計了！

檢測穿過(guò)的細胞數一般有兩種方法：

1.直接計數法
①“貼壁"細胞計數
這里所謂的“貼壁"是指細胞穿過(guò)膜后，可以附著(zhù)在膜的下室側而不會(huì )掉到下室里面去?？梢酝ㄟ^(guò)給細胞染色（如結晶紫染色、臺盼藍染色、Giemsa染色、蘇木精染色、伊紅染色），在鏡下計數細胞。
②“非貼壁"細胞計數
由于某些細胞自身的原因或某些膜的關(guān)系，有時(shí)細胞在穿過(guò)膜后不能附著(zhù)在膜上，而是掉進(jìn)下室。這種情況下可以收集下層培養液，用流式細胞儀計數細胞量，也可用細胞計數的方法直接在鏡下計數。

2.間接計數法
間接計數法主要用于穿過(guò)細胞過(guò)多，而無(wú)法通過(guò)計數獲得準確的細胞數所采用的方法，通過(guò)標記、染色處理（例如MTT法、熒光試劑檢測、結晶紫檢測）后，測量OD值或熒光值，間接反映細胞數量。

文章中出現的Transwell侵襲實(shí)驗圖一般是這樣的：
（小tips：NC 即Negative control，表示陰性對照，siRNA上期剛說(shuō)過(guò)，大家還記得嗎？
文章中大家可能還會(huì )遇到MOCK組，其實(shí)就是空白對照。所謂的空白對照有兩種：一種是什么也不處理，類(lèi)似陰性對照組；一種是只加轉染試劑，不加轉染的質(zhì)?；蛘遱iRNA，類(lèi)似假手術(shù)組）

這張圖表示的是NC組（對照組）細胞侵襲少于siRNA組（沉默某基因的表達），可以理解為沉默某基因后，可以促進(jìn)HGC-27細胞的侵襲。

當然，這張圖是比較簡(jiǎn)單的，復雜一點(diǎn)的無(wú)非就是條件多了，數據多了，大家只要理清楚細胞侵襲實(shí)驗的原理，知道圖是怎么做出來(lái)的，對應著(zhù)圖注都可以很輕松的理解圖所表達的意思。

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