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免疫細胞轉染實(shí)驗失敗了千萬(wàn)不要慌！
發(fā)布時(shí)間： 2022-11-03 點(diǎn)擊次數： 846次免疫細胞轉染在細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)中占據重要地位，廣泛用于基因與蛋白功能研究，成為實(shí)驗室工作中的常規技術(shù)手段之一。沒(méi)有一種方法適用于所有的細胞和實(shí)驗，需要根據細胞類(lèi)型和實(shí)驗進(jìn)行選擇。理想的方法應具有高轉染效率，低細胞毒性和對正常生理學(xué)的影響最小，并且易于使用和具有可重復性等特點(diǎn)。常用于哺乳動(dòng)物細胞轉染的方法有磷酸鈣法、陽(yáng)離子脂質(zhì)體法、病毒轉染法和電穿孔法。然而，免疫細胞轉染實(shí)驗出現失敗也不要驚訝，常見(jiàn)的異常結果是細胞大量死亡、轉染效率不高、重復實(shí)驗不穩定。如何找到問(wèn)題所在，讓實(shí)驗順利進(jìn)行，就顯得比較重要。例如細胞轉染實(shí)驗失敗導致細胞大量死亡如何處理我們根據以下的分析來(lái)針對性解決：1.細胞狀態(tài)不佳：選擇生長(cháng)旺盛的細胞進(jìn)行轉染實(shí)驗。2.核酸純度不夠或內毒素過(guò)高：采用高質(zhì)量核酸與去內毒素的核酸。3.目的蛋白對細胞的毒性：嘗試進(jìn)行再設計。4.轉染試劑過(guò)多：降低轉染試劑的量；轉染后4-6h換液。5.污染：排查污染源或重新復蘇細胞。6.抗生素存在：特別是陽(yáng)離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細胞，降低細胞的活性，導致轉染效率降低，可降低抗生素濃度或不使用抗生素。7.營(yíng)養不足：如果無(wú)血清條件下轉染的，要根據狀態(tài)及時(shí)補充營(yíng)養。- 下一篇：DAPI染DNA的原理及使用方法
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