平滑肌細胞的分離和培養

步驟

1. 從小牛取胸主動(dòng)脈。

2. 將胸主動(dòng)脈浸入 Hanks 液。

3. 分離細胞之前將動(dòng)脈放在冰上。

4. 將動(dòng)脈放入 150 mm × 25 mm Petri 培養皿。

5. 用解剖剪沿長(cháng)軸剪開(kāi)動(dòng)脈。

6. 用手術(shù)刀片輕刮動(dòng)脈內腔面，以除去內皮細胞。

7. 將動(dòng)脈的中膜與內膜和外膜分離。

8. 將中膜切成約 1 cm2 大小的組織塊。

9. 將中膜組織塊放入 60 mm × 15 mm Petri 培養皿，內膜側朝下。

10. 讓組織塊貼壁約 10 min。

11. 直接在組織塊上注 1 ml SMCM（平滑肌培養液（smooth muscle cell medium，SMCM）：DMEM 添加 20 % FBS，100 U/ml 青霉素和 100 μg/ml 鏈霉素）。

12. 將組織塊放入濕潤的培養箱，在 37°C 和 10% CO2 條件下孵育。

13. 第 2 天加入 5 ml SMCM，注意勿讓組織塊去附著(zhù)。

14. 將組織塊繼續孵育 10 d。此后，平滑肌細胞從組織塊遷移出來(lái)，并變?yōu)閱螌印?br style="border: 0px solid currentcolor; box-sizing: border-box; --tw-shadow:0 0 #0000; max-width: 100%; background: none !important; font-size: 0.32rem !important; line-height: 0.48rem !important; margin: 0px !important;"/>
15. 細胞生長(cháng)接近形成單層時(shí)，用 0.25 % 胰蛋白酶和 EDTA 混合液傳代。