染料排斥法測定細胞生存力實(shí)驗

材料與儀器

胰蛋白酶
巴斯德吸管 顯微鏡 手執計數器 生存力染料 血細胞計數板

步驟

材料

無(wú)菌

受試細胞，如胰蛋白酶消化的貼壁細胞、融化冷凍的細胞或原代離散的細胞
合適的生長(cháng)液 20ml
0.25% 胰蛋白酶 5ml
D-PBSA10ml

非滅菌

血細胞計數板
生存力染料 1ml (如用D-PBSA 或HBSS 配制的 0.4% 臺盼藍或 1% 萘黑）
巴斯德吸管
顯微鏡
手執計數器

操作步驟

1. 用胰蛋白酶消化或離心與重懸，制備高濃度的細胞懸液（約1X106 個(gè)/ml)。

2. 取一塊干凈的血細胞計數板，將蓋玻片間定在適當位置上。

3 . 將一滴細胞懸液和一滴（臺盼藍）或四滴（萘黑）染料混勻。

4 . 加至血細胞計數板的計數室中。

5 . 靜置1～2min (但不要放置很久，否則活細胞會(huì )受到損傷而吸收染料）。

6 . 將計數板置于顯微鏡下，選擇10X 物鏡，利用網(wǎng)格線(xiàn)聚焦。
7 . 計數細胞總數以及著(zhù)色細胞數。

8 .清洗血細胞計數板，放人盒內。

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