PCR凝膠電泳問(wèn)題，全都總結出來(lái)了！

1.Marker相關(guān)問(wèn)題

1.1Marker 不直，偏斜或拖尾

原因：

1.膠配制的問(wèn)題，制作不均勻或有污染或瓊脂糖質(zhì)量不好；

2.電泳緩沖液過(guò)于老舊，考慮更換；

3.電壓太高，凝膠受熱導致不均勻；

4.電泳槽的電極歪斜；

1.2Maker 跑不開(kāi)

原因：

1.膠濃度太大；

2.電泳時(shí)間太短；

2.PCR產(chǎn)物相關(guān)問(wèn)題

2.1沒(méi)條帶

原因：

沒(méi)跑出來(lái)

2.2條帶微弱

原因：

1.DNA降解

2.上樣量過(guò)少

3.沒(méi)跑出來(lái)，產(chǎn)物濃度過(guò)低，需再次PCR

2.3非特異性擴增

原因：

1.引物設計不合理。需重新設計引物，balst檢測引物特異性；

2.試劑被污染。包括水，酶，引物等。重新更換；

3.退火溫度太高。提高退火溫度，增加退火時(shí)間，減少循環(huán)數；

4.酶加入過(guò)多；

2.4 PCR產(chǎn)物彌散，拖尾或偏斜，Maker正常

原因：

1. 引物保存不當，降解。重新配制引物工作液。

2.模板降解或過(guò)量。重新檢查模板質(zhì)量，減少模板用量。

3.非特異性擴增。提高退火溫度，增加退火時(shí)間，減少循環(huán)數。

4.酶量過(guò)多或酶的質(zhì)量差。

5. 有蛋白和鹽的污染。

2.5 PCR產(chǎn)物和Maker 都彌散或拖尾

原因：

1.膠配制的問(wèn)題，制作不均勻或有污染或瓊脂糖質(zhì)量不好；

2.電泳緩沖液過(guò)于老舊，考慮更換。

3.電壓太高，凝膠受熱導致不均勻。

2.6 PCR產(chǎn)物與目的大小不符合

原因：

1.引物特異性不好。需重新設計引物，balst檢測引物特異性。

2.存在新的異構體。

3.是目的基因，但大小有差異（我遇到過(guò)）。膠回收過(guò)后再次電泳條帶變?yōu)檎４笮?。遇到這個(gè)情況可以測序看看結果。

2.7 電泳孔亮

原因：有蛋白或者多糖的污染，這些大分子物質(zhì)影響了DNA或RNA的出孔，使其停留在孔中或者出孔很慢。導致孔以及接近孔的位置很亮。

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