提取純化產(chǎn)品冊---02 組織保存產(chǎn)品

RNA-easy^TM Isolation Reagent（保存條件：2-8℃儲存 , 于 2-8℃運輸）

常溫RNA提取試劑(R701)

操作簡(jiǎn)便 單相提取，無(wú)需多相分層，并且全程可在室溫進(jìn)行操作

兼容性廣 廣泛適用于各類(lèi)動(dòng)植物和微生物樣品，輕松應對各類(lèi)培養細胞

RNA 質(zhì)量高 RNA 純度高，完整度好，產(chǎn)量媲美傳統 Trizol 法提取

安全低毒 無(wú)需使用CHCL3、β- 巰基乙醇等有毒有害試劑

產(chǎn)品概念

RNA-easy^TM Isolation Reagent廣泛適用于從各類(lèi)動(dòng)物組織、植物材料、培養細胞和微生物等樣品中提取Total RNA和Small RNA。與傳統Trizol提取方法相比，本產(chǎn)品使用方法簡(jiǎn)單，不需要使用CHCL3進(jìn)行分層，且全程可在常溫進(jìn)行；此外，本產(chǎn)品在高效地抑制RNA酶(RNase)活性的同時(shí)，將蛋白質(zhì)、DNA、多糖等雜質(zhì)沉淀到管底，從而實(shí)現單相提取，并有力保證了RNA的完整度和純度。使用本產(chǎn)品在50 min內即可完成全部的提取過(guò)程，提取的RNA可以直接用于cDNA克隆、qRT-PCR檢測、mRNA純化、體外翻譯、Northern blotting雜交、高通量測序等各種分子生物學(xué)實(shí)驗。

性能展示

樣本兼容性廣

分別使用 Vazyme #R701 與市售 Trizol 產(chǎn)品 ( 來(lái)自 T、Ta、Ti 公司 )，按照各自說(shuō)明書(shū)對小鼠肝臟 (25 mg)、玉米葉 (20 mg) 和 HEK293細胞 (2 × 10⁶ 個(gè) ) 進(jìn)行總 RNA 提取，并對最終獲得的 RNA 產(chǎn)物(1 μg) 進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測，可以看出，Vazyme #R701 能很好地兼容不同樣本總 RNA 的提取。

RNA 產(chǎn)量高

分別使用Vazyme #R701 與市售Trizol產(chǎn)品(分別來(lái)自 T、Ta、Ti公司)，按照各自說(shuō)明書(shū)對小鼠肝臟(25 mg)、玉米葉(20 mg)和HEK293細胞 (2×106個(gè))進(jìn)行總RNA提取。以T公司產(chǎn)量為基準，可以看出，Vazyme #R701 提取不同樣本的總RNA與市售其他產(chǎn)品相比，產(chǎn)量更高，且對細胞樣本的提取表現最佳。

RNA 質(zhì)量高

分別使用 Vazyme #R701 與市售 Trizol 產(chǎn)品，按照各自說(shuō)明書(shū)對 HEK293 細胞 (2 × 10⁶ 個(gè) ) 進(jìn)行總 RNA 提取，并對最終獲得的 RNA 產(chǎn)物使用 Onedrop 測定 OD260/280 比值 , 以及 Agilent 2100 Bioanalyzer 進(jìn)行 RNA 完整度分析。從圖中可以看出，Vazyme #R701 提取的 RNA 完整度好，純度與 T 公司和 Ta 公司處于相同水平，超過(guò) Ti 公司 (P 值 =0.0077)。

操作流程概要

適用范圍
動(dòng)物組織（肝臟、心臟、肌肉、腦組織、腎臟、斑馬魚(yú)胚胎等）、植物組織（水稻、玉米、擬南芥、小麥、大豆、土豆、煙草等）、
細胞（HEK293、Hela、雜交瘤、CHOK1、黑色素瘤 B16F10、HepG2、心肌細胞 H9C2、MEF 等）、細菌（大腸桿菌等）、真菌（酵母、曲霉等）

組分

自備材料

異丙醇，75% 乙醇 (RNase-free ddH2O 配制 )，RNase-free ddH2O

樣本制備及提取流程

樣本制備

動(dòng)物/植物組織

液氮研磨：

將新鮮組織經(jīng)液氮凍后，迅速轉移至液氮預冷的研缽中，用研杵研磨，期間不斷加入液氮，直至研磨成粉末狀（無(wú)明顯可見(jiàn)顆粒）。

將研磨成粉的樣品轉移至離心管中，大約每25mg組織加入500μl RNA-easy (RNA-easyTM Isolation Reagent)，劇烈振蕩或移液槍吹打，使樣品充分裂解。
直接裂解：計算細胞數量，全部棄除培養液，每10 cm2 培養面積的細胞加入2-3 ml RNA-easy，用槍吹打使細胞從壁上全部脫落，將裂解液轉移至離心管中，
用移液器反復吹打直至無(wú)明顯顆粒樣存在。
胰酶消化處理：計算細胞數量，將胰酶消化下來(lái)的細胞進(jìn)行300 g 離心5 min，收集細胞。每10 cm2 培養面積的細胞加入2-3 ml RNA-easy，用槍吹打直至看不
到細胞團塊。
離心收集細胞，用PBS洗滌一次；每1-5×106個(gè)細胞加入500μl RNA-easy；用移液器反復吹打直至無(wú)明顯顆粒樣存在。
樣本制備
▲ 研磨會(huì )部分影響RNA的得率和質(zhì)量。
▲ 每500ul RNA-easy 試劑最多可以裂解50 mg常規組織，過(guò)多的樣本量可能會(huì )導致裂解不充分，并使產(chǎn)物純度降低。
▲ 部分良好的韌性或含較多外基質(zhì)的組織，可能會(huì )出現不能全部溶解的現象，在步驟2中將進(jìn)入沉淀中，不會(huì )影響后續 RNA 提取及RNA質(zhì)量。
▲ 若沒(méi)有條件用液氮研磨，可將新鮮組織盡量剪碎浸泡在RNA-easy中，用電動(dòng)勻漿器高速勻漿至組織塊全部裂解；或將新鮮組織充分浸泡在 RNA Keeper Tissue
Stabilizer (Vazyme #R501) 中，即可有效失活 RNase，再用 RNA-easy 處理并用電動(dòng)勻漿器勻漿至全部裂解

培養細胞

貼壁細胞：
懸浮細胞：
將新鮮組織經(jīng)液氮速凍后，迅速轉移至液氮預冷的研缽中，用研杵研磨，期間不斷加入液氮，直至研磨成粉末狀(無(wú)明顯可見(jiàn)顆粒)。
將研磨成粉的樣品轉移至離心管中，大約每25 mg組織加入500 μl RNA-easy (RNA-easyTM Isolation Reagent)，劇烈振蕩或移液槍吹打，使樣品充分裂解。
直接裂解：計算細胞數量，棄除培養液，每10 cm2 培養面積的細胞加入2-3 ml RNA-easy，用槍吹打使全部的細胞從壁上脫落，將裂解液轉移至離心管中，
用移液器反復吹打直至無(wú)明顯顆粒樣存在。
胰酶消化處理：計算細胞數量，將胰酶消化下來(lái)的細胞進(jìn)行300 g 離心5 min，收集細胞。每10 cm2 培養面積的細胞加入2-3 ml RNA-easy，用槍吹打直至看不
到細胞團塊。
離心收集細胞，用PBS洗滌一次；每1-5 × 106 個(gè)細胞加入500 μl RNA-easy；用移液器反復吹打直至無(wú)明顯顆粒樣存在。

提取流程
步驟 1
向上述裂解液中加入2/5體積的RNase-free ddH2O (每500μl RNA-easy使用200 ul)，劇
烈震蕩15sec，室溫靜置5min。
步驟 2
室溫，12,000×g離心 15 min。
步驟 3
取出離心管，小心吸取上層水相至一個(gè)新的離心管中。
步驟 4
加入等體積異丙醇，上下顛倒混勻，室溫靜置10 min。
步驟 5
使用12,000Xg室溫離心 10 min，通?？梢钥匆?jiàn)白色膠狀沉淀，小心棄去上清。
步驟 6
加入 500 μl用 RNase-free ddH2O 配制的 75% 乙醇，上下顛倒數次，充分洗滌管蓋和管壁，
并輕彈管底，讓沉淀懸浮起來(lái)。
步驟 7
使用8,000×g室溫離心 3 min，棄去上清。
步驟 8
重復步驟6和7一遍，棄盡上清 。   步驟 9
加入適量的 RNase-free ddH2O 溶解沉淀，室溫渦旋 3 min ( 或使用移液器反復吹打 )，有效溶解樣品。提取的 RNA 產(chǎn)物可以分裝后在 -85 - -65°C長(cháng)期保存，在 -30 - -15°C僅可短期保存。

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