科研人技能！固體培養基的配制及儲存注意事項

1 前言

在微生物學(xué)研究中，培養基扮演著(zhù)至關(guān)重要的角色，它為微生物的生長(cháng)提供了一個(gè)可靠的環(huán)境，是其生長(cháng)繁衍的營(yíng)養基質(zhì)。其中，不含凝固劑（如瓊脂）、呈液體狀態(tài)的培養基，我們稱(chēng)為液體培養基；呈固體狀態(tài)的培養基為固體培養基。向液體培養基中加入瓊脂后制成的瓊脂固體培養基，是我們在實(shí)驗室中最經(jīng)常用的培養基之一，微生物在固體培養基的表面可形成肉眼可見(jiàn)的菌落。今天我們就來(lái)聊聊固體培養基的配制及儲存注意事項。
 

2 固體培養基的配制

首先，我們需要根據實(shí)驗目的選擇適合的固體培養基配方。常見(jiàn)的固體培養基包括營(yíng)養瓊脂、LB培養基、麥康凱瓊脂等。每種培養基都有其特定的應用場(chǎng)景，下面我們簡(jiǎn)單羅列了一些常用的固體培養基的配方及適用場(chǎng)景，供大家參考。

選擇好合適的培養基之后，我們再按照選定的配方準確稱(chēng)量所需的物質(zhì)成分。精確的稱(chēng)量對于確保培養基的質(zhì)量至關(guān)重要，但我們再稱(chēng)取肯定不能一把就稱(chēng)到準確的重量，通常來(lái)說(shuō)，稱(chēng)取的克重可以大一丟丟，但絕對不能小，因為我們在加入到錐形瓶里時(shí)不可避免地會(huì )有一些粉末殘留在稱(chēng)量盤(pán)上，所以稍微大一點(diǎn)沒(méi)關(guān)系，但絕對不能小于所需克重，因為要確保微生物生長(cháng)所需要的營(yíng)養條件足夠。
 

例如，要稱(chēng)取5g的成分的話(huà)，5.1g～5.2g之間的任何值都被視為符合要求。但對于一些微量成分，建議使用能夠精確到0.001g或者更高精度的天平，并且盡可能減少操作誤差，以保證微量成分的準確性。
 

以L(fǎng)B培養基為例，一般建議在一個(gè)稱(chēng)量盤(pán)中依次稱(chēng)量不同的成分，每稱(chēng)完一個(gè)成分就歸零，向同一個(gè)稱(chēng)量盤(pán)內加入下一個(gè)成分進(jìn)行稱(chēng)量。這還是因為我們在將粉末加入到錐形瓶里時(shí)，會(huì )有一些粉末殘留在稱(chēng)量盤(pán)上。如果你用不同的稱(chēng)量盤(pán)分別稱(chēng)量那么誤差就會(huì )變大，用同一個(gè)稱(chēng)量盤(pán)稱(chēng)量就能減小這部分誤差。
 

稱(chēng)完后，我們一般先往錐形瓶的瓶底，加一點(diǎn)點(diǎn)水，再加入稱(chēng)好的粉末，避免粉末直接加到瓶?jì)群髸?huì )飛散。加入粉末后，搖勻，接著(zhù)在定容至目標體積（需要注意的是，錐形瓶?jì)鹊囊后w總體積不能超過(guò)容量的2/3）。然后在瓶口處蓋上一張培養基封口膜，用橡皮筋固定住，再在外面覆蓋上一層錫箔紙。

做完上面這些步驟我們就可以將配好的培養基放到高壓滅菌鍋內進(jìn)行滅菌啦！
 

滅完菌，待培養基稍稍冷卻之后，我們就可以準備倒平板了，具體的溫度大約是50°C我們可以試著(zhù)用手去摸瓶壁，摸著(zhù)稍稍燙手即可。然后在超凈臺內，迅速倒入無(wú)菌的培養皿中，倒入的量不必精確，但要確保覆蓋整個(gè)皿的底面，對于標準尺寸的培養皿來(lái)說(shuō)，大約是20mL。
 

培養基冷卻后，它就會(huì )凝固并變成不透明的，但所有凝固完需要的時(shí)間一般會(huì )比較久。一般倒完平板后就放在超凈臺內，開(kāi)抽風(fēng)，不要開(kāi)紫外，玻璃擋板留一小條縫，放置過(guò)夜。最好寫(xiě)一張便簽貼，標明一下你在冷卻平板，貼在超凈臺明顯的位置，防止有些同學(xué)不知道，誤用了你在晾平板的超凈臺，導致你的平板受到污染。
 

平板冷卻凝固后，將培養皿倒置過(guò)來(lái)，以防止在瓊脂表面凝結。然后將倒置的培養基裝進(jìn)大小合適的保鮮袋內，并在保鮮袋上標記好對應培養基的名稱(chēng)及配制日期，放入4℃冰箱保存即可。

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