ZETA LIFE如何高效率轉染RAW264.7細胞

ZETA LIFE如何高效率轉染RAW264.7細胞

1. 細胞接種：提前 1 天將細胞接種到培養板，如 6 孔板，使用含 10% 胎牛血清的高糖型 DMEM 培養基，且培養基中不加雙抗，使轉染時(shí)細胞匯合度達到 60%-80% 左右。

2. 質(zhì)粒準備：使用無(wú)內毒素提取試劑盒提取質(zhì)粒，將其溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水中，保證質(zhì)粒濃度在 500 - 700ng/ul 左右。

3. 復合物制備：將質(zhì)粒 DNA 與 Zeta Life Advanced Transfection Reagent 按照 1:1 的比例直接混合，例如 12ug 質(zhì)粒對應 12ul 轉染試劑，用移液器吹吸 10 - 15 次混勻，室溫靜止 10 - 15 分鐘。

4. 轉染細胞：將復合物加入含有(血清)細胞培養基的細胞培養板中，并輕輕混勻，放入 37℃、5% CO?培養箱中繼續培養。

5. 細胞換液：轉染 24 小時(shí)后對細胞進(jìn)行正常換液。

6. 結果分析：對于質(zhì)粒 DNA 轉染，在轉染 48 - 72 小時(shí)后，通過(guò)熒光檢測來(lái)評估轉染效率；在 48 - 96 小時(shí)后，檢測 mRNA 或蛋白的表達情況。如果要進(jìn)行穩定表達細胞株的篩選，則在轉染后 24 - 48 小時(shí)左右，加入適量的藥物進(jìn)行篩選操作。