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發(fā)布時(shí)間： 2022-10-11 點(diǎn)擊次數： 1170次理想的免疫細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優(yōu)點(diǎn)。病毒介導的轉染技術(shù)，是目前轉染效率較高的方法，同時(shí)具有細胞毒性很低的優(yōu)勢。但是病毒轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類(lèi)型有很強的選擇性，在一般實(shí)驗室中很難普及。其它物理和化學(xué)介導的轉染方法，則各有其特點(diǎn)。下面分享幾個(gè)經(jīng)典的免疫細胞轉染方法：1.人工脂質(zhì)體法帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物，進(jìn)而可被細胞內吞穩定轉染/瞬時(shí)性轉染。這種方法幾乎適用于所有細胞，轉染效率高、重復型好，但轉染時(shí)需要去除血清，轉染效果隨細胞類(lèi)型變化大。2.磷酸鈣法通常穿了“隱身衣”核酸分子在“照妖鏡”磷酸鈣的作用下可形成“肉眼可見(jiàn)”的磷酸鈣-DNA共沉淀，可使共沉淀中濃縮DNA分子與細胞表面結合并通過(guò)內吞作用進(jìn)入細胞。該法可用于瞬時(shí)或穩定轉染。然而因其對pH、溫度和緩沖液鹽濃度的微小變化十分敏感，所得結果容易出現差異，且對許多類(lèi)型的細胞培養物(尤其是原代細胞)具有細胞毒性，轉染效率較差。3.電穿孔法此法利用高脈沖電壓破壞細胞膜電位，使得DNA通過(guò)膜上形成的小孔導入穩定/瞬時(shí)性轉染，適用于所有類(lèi)型的細胞，但細胞致死率高，DNA和細胞用量大，且需根據不同細胞類(lèi)型優(yōu)化電穿孔實(shí)驗條件。其他物理基因輸送法還包括基因槍、直接顯微注射等方式。前者又稱(chēng)為粒子轟擊，可將包裹著(zhù)核酸的顯微重金屬顆粒告訴射入受體細胞內，適用于瞬時(shí)性轉染。該技術(shù)需要昂貴的設備，且細胞死亡率較高。而后者則是通過(guò)精細的注射針將核酸送入胞漿中，一次只能輸送一個(gè)細胞中，適用于構建轉基因動(dòng)物或輸送人工染色體。
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