Biozellen細胞3D培養基質(zhì)膠套裝

產(chǎn)品概述：

Biozellen細胞3D培養基質(zhì)膠套裝

Biozellen®基質(zhì)膠特點(diǎn)

1、100%植物源材料，無(wú)任何動(dòng)物成分；

2、胺基酸序列100%人源化 ；

3、可調控基質(zhì)膠硬度進(jìn)行多種細胞培養；

4、3D細胞/類(lèi)器官培養種類(lèi)數量范圍更廣；

5、無(wú)人畜共通病原菌或毒素風(fēng)險；

6、較為適用于醫療級生物原料；

7、高活性、高純度、可融化；

8、4度運輸、4度保存；

9、2年保存時(shí)間；

10、3D培養結束后基質(zhì)膠可以溫和融化，并保留3D細胞/類(lèi)器官結構完整性；

Biozellen細胞3D培養基質(zhì)膠套裝

Catalog No.   B-P-00002-2、B-P-00002-4、B-P-00002-10

Specification  2ml-kit、4ml-kit 、10ml-kit

Storage       4℃保存、 保存兩年

一、產(chǎn)品描述

Biozellen®3D細胞培養基質(zhì)膠套裝包含整套基質(zhì)膠、膠體固定液、膠體溶解液，可應用到3D細胞培養與微環(huán)境應用等；本試劑盒操作便利且可調控基質(zhì)膠硬度進(jìn)行多種細胞培養測試；植物膠體可快速形成水凝膠， 請操作前詳細閱讀此使用指南。

（Biozellen®3D細胞培養基質(zhì)膠套裝為植物來(lái)源，無(wú)動(dòng)物成分）

二、應用

•3D細胞球體培養試驗

•小鼠皮下成瘤

•細胞遷移實(shí)驗

•適合用于3D細胞藥物篩檢平臺

•細胞生長(cháng)和分化

•代謝/毒理學(xué)研究

三、樣本類(lèi)型

•腫瘤細胞系、

四、試劑盒組分

五、使用步驟：

A、試劑制備

A基質(zhì)膠：將A基質(zhì)膠溶于37℃水浴槽回溫10分鐘， 確認*融解.

C緩沖溶液(1X)制備：使用前將10X C緩沖溶液用冰的無(wú)細胞培養液(例如： 無(wú)血清DMEM、opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .

D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

B、Biozellen®3D細胞培養基質(zhì)膠的制備

全部步驟需要在無(wú)菌環(huán)境內操作，操作步驟如下：

1. 將24孔培養板放置于冰上預冷半小時(shí)。
2. 細胞計數后取 2×105~2×107 細胞與 0.5 毫升 37℃ 細胞培養基均勻混合，并與0.5毫升37℃ A膠按照 1:1 等比例均勻混合，最終細胞密度1*105~1*107cells/mL。

注：請選擇適當的培養溶液與條件進(jìn)行試驗。

3.取 20-40 微升步驟 2的混合液滴于 步驟 1 預冷的培養板上，膠體將于 5 分鐘內成膠。 注: 測試膠體是否成膠，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進(jìn)行確認。

4.待膠體成膠后，添加1毫升冰的1X C緩沖溶液，并蓋過(guò)步驟3 的膠溶液，固定 15 分鐘。

5.待15分鐘固定后，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細胞生長(cháng)之培養基溶液。

6將含有細胞的膠于37°C 二氧化碳培養箱內進(jìn)行7~14天的培養，并觀(guān)察細胞球體的形成，按正常培養基更換頻率進(jìn)行更換操作。

C、溶膠與收集細胞球體準備程序

小心的將培養基吸取移除，并用1X PBS進(jìn)行清洗。

小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的D緩沖溶液，蓋過(guò)膠滴于室溫反應 5分鐘。

溫和的用1毫升移液管吸取，直到膠滴*溶解。

將含有細胞球體的溶液吸入1.5 毫升離心管，用1000 rpm的轉速離心10分鐘，移除上清液體并收集細胞球體做分析。

D、收集單顆細胞準備程序

在分離單細胞前，先按上述溶膠與收集細胞球體準備程序進(jìn)行操作

1. 添加trypsin-EDTA并與收集的細胞球體于37°C混合反應。

2. 用1毫升移液管混合，直到細胞體*分解。

3. 待細胞球體*分解，加入3倍體積的1X PBS，并用1000轉的轉速進(jìn)行離心10分鐘，并移除上清液體收集沉淀的單細胞做分析。

E、細胞遷移實(shí)驗準備程序

1. 準備Transwell裝置及無(wú)血清DMEM細胞培養液 (用于稀釋A膠)。

2. A膠 (2X) (貨號:B-P-00002-A) 置于37 ℃水浴槽回溫10分鐘，確認*融解。

3. 用無(wú)血清DMEM細胞培養液將A膠 (2X)稀釋50倍。

4. 根據Transwell上室底部面積加入100-120 ul/cm2稀釋后的A 膠稀釋液到Transwell上室中。

5. 將步驟4在4 ℃冰箱孵育30分鐘。

6. 將多余的稀釋液吸出，并在Transwell上室中加入無(wú)血清的癌細胞系細胞懸浮液使細胞濃度約7.5 x 104 cells/well.。

7. 在Transwell下室中加入含10 %血清的細胞培養液做為chemoattractant，吸引癌細胞系進(jìn)行遷移。

F、小鼠皮下成瘤實(shí)驗準備程序

1. 將 A膠 (2X) (貨號:B-P-00002-A) 置于37 ℃水浴槽回溫10分鐘，確認*融解。

2. 將C緩沖溶液(10X) 貨號:B-P-00002-C)與冰的無(wú)血清細胞培養液 (例如: 無(wú)血清DMEM或內含VEGF、heparin的無(wú)血清DMEM) 按1:4比例均勻混合配置。(例如:1 ml C緩沖溶液(10X) 與 4 ml 無(wú)血清DMEM混合，不可用PBS稀釋)

3. 將 A膠 (2X) 與約2*106 cells/ml的癌細胞系懸浮液按1:1等比例均勻混合配置，癌細胞系懸浮液最終濃度約為106 cells/ml。

4. 選用21-25 G的針頭 (避免破壞細胞)，抽取0.2-0.3 ml 預冷稀釋后的C緩沖溶液。(C緩沖溶液用于A(yíng)膠成膠反應)

5. 使用步驟4的同一支針管，再抽取0.1-0.7 ml含細胞的A膠混合液，在冰上孵育五分鐘。

6. 以皮下注射方式注射0.3-1.0 ml至小鼠。(需一次注射完含C緩沖溶液的A膠混合液)

注1: 注射體積可依不同實(shí)驗目的做調整，若為血管生成研究注射體積需至少0.5 ml。

注2: 此步驟依實(shí)驗需求可執行或不執行，若需呈現明顯的皮下注射隆起效果，可于注射完畢后，在小鼠注射部位冰敷5-10分鐘

，若需呈現明顯的皮下注射隆起效果，可于注射完畢后，在小鼠注射部位冰敷5-10分鐘。

7. 培養一至三周后可摘取接種的腫瘤組織。

注3: 若為血管生成研究，應注射含VEGF及heparin的A膠，以促進(jìn)血管生成。約三天后，可摘取含有新血管生成的腫瘤組織。

六、案例分享

A.形成3D腫瘤球體成功案例分享

B.Biozellen基質(zhì)膠被溶解后分離的完整3D細胞結構照片

培養后的3D細胞球體， 在Biozellen基質(zhì)膠被試劑盒里面的

D Buffer溶解分離后仍然可以得到完整的3D細胞結構

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