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Advanced 系列高效 DNA RNA 轉染試劑操作說(shuō)明

發(fā)布時(shí)間： 2021-07-01　　點(diǎn)擊次數： 3060次

Advanced 系列高效 DNA RNA 轉染試劑操作說(shuō)明

產(chǎn)品名稱(chēng)

Advanced DNA RNA Transfection Reagent

包裝規格
1.產(chǎn)品貨號：AD600025、AD600050、AD600075、AD600100、AD600150、AD600300；
2.規格：0.25ml、0.5ml、0.75ml、1ml、1.5ml、3ml；

儲存條件
常溫運輸，4℃保存，可保存兩年，拒絕反復凍融。

材料準備
1.RNA 濃度 20 uM /L。
2.質(zhì)粒 DNA 濃度 300 ng-2 ug/ul（注意：①溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水；②無(wú)內毒素）。

操作步驟
1.提前 1 天接種細胞：細胞匯合度在 60-80%左右，再進(jìn)行轉染。
2. 核酸復合物制備：將核酸與轉染試劑按照 1:1 關(guān)系直接混合，用移液器吹吸 10-15 次混勻，室溫靜止 10-15 分鐘。
3.在細胞培養基中加入核酸復合物：根據參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻；細胞培養基里面可以含有血清。
4.細胞換液：轉染 24 小時(shí)后對細胞進(jìn)行正常換液，懸浮細胞轉染過(guò)程中不用換液。
5.分析結果：質(zhì)粒 DNA 轉染 48-72 小時(shí)后熒光檢測轉染效率，48-96 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達。若進(jìn)行穩定表達細胞株的篩選，則在轉染后 24-48 小時(shí)左右加入適量的藥物進(jìn)行篩選。siRNA 轉染后 9小時(shí)熒光檢測轉染效率，48-72 小時(shí)檢測 mRNA 或蛋白表達。

注意事項
? 1、質(zhì)粒 DNA 必須溶解于無(wú)菌雙蒸水或超純水，但不能溶解于提取試劑盒提供的 Buffer。溶解于 Buffer的質(zhì)粒轉染效率會(huì )下降 80%左右，甚至會(huì )轉染失敗。
? 2、質(zhì)粒必須去除內毒素，內毒素對細胞將產(chǎn)生很大的細胞毒性，會(huì )導致轉染效率下降 70%-80%左右，甚至導致轉染失?。ㄍ扑]使用 Qiagen、TIANGEN、Omega 去內毒素質(zhì)粒提取試劑盒）。
? 3、復合物的制備過(guò)程中是絕對不能用其他任何試劑對核酸或轉染試劑進(jìn)行稀釋?zhuān)恍鑼⒑怂岷娃D染試劑兩者按 1:1 比例直接混合，如果進(jìn)行了稀釋會(huì )導致轉染失。
? 4、轉染試劑與核酸混勻后用移液器吹打 10-15 次，室溫孵育 10-15 分鐘后即可加入細胞培養板。
? 5、轉染 24 小時(shí)后進(jìn)行正常換液，不能像 Lipo2000 一樣轉染 4-6 小時(shí)后換液。
? 6、原代細胞、免疫細胞轉染時(shí)，細胞基礎培養基里面不能含有雙抗培養基。

轉染操作示意圖

不同轉染實(shí)驗各成分推薦用量

僅供科學(xué)研究使用，禁止用于它用

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