miRNA實(shí)驗解決方案（操作手冊）---第一章：miRNA簡(jiǎn)介

一、miRNA的合成途徑
在動(dòng)物細胞核中，miRNA基因的初級轉錄產(chǎn)物Pri-miRNA（長(cháng)度大約為300～1000 nt）被RNase IIl-Drosha 酶切割成為發(fā)夾結構前體 miRNA（Pre-miRNA，長(cháng)度大約為70～100nt）。經(jīng)過(guò)初步剪切后，Pre-miRNA在轉運蛋白Exportin-5的作用下由細胞核內轉運到細胞質(zhì)中，然后由另一種RNase Ill-Dicer 酶進(jìn)一步切割產(chǎn)生成熟的miRNA（長(cháng)度大約為21～23 nt）。成熟的miRNA與類(lèi)似RISC的核糖體蛋白結合形成miRNA-RISC復合體，從而引起靶mRNA降解或者翻譯抑制。miRNA參與胚胎發(fā)育、細胞分化、細胞增殖、細胞凋亡、細胞死亡、免疫調節以及物質(zhì)代謝等過(guò)程。

植物miRNA的形成過(guò)程全部是在細胞核中完成的，不存在Pre-miRNA從細胞核到細胞質(zhì)轉運過(guò)程。首先，細胞核中編碼miRNA的基因在RNA聚合酶II的作用下轉錄形成Pri-miRNA，然后在Dicer酶-DCL1的作用下形成Pre-miRNA，DCL1繼續作用于Pre-miRNA從而形成成熟的miRNA，以上過(guò)程均在細胞核中完成。成熟的miRNA或者是在細胞核中與類(lèi)似RISC的核糖體蛋白結合形成miRNA-RISC復合體，然后被核轉運蛋白HST運送到細胞質(zhì)中，或者是先被HST運送到細胞質(zhì)中，再與核糖體蛋白結合形成miRNA-RISC復合體。miRNA影響植物的生長(cháng)發(fā)育、激素的調節、信號的轉導、植物病害和應答環(huán)境脅迫。

二、miRNA的特性

miRNA最典型的特性就是兩點(diǎn)--保守性和特異性。

·保守性

miRNA的結構和序列在物種之間幾乎保持不變。

結構的保守性：無(wú)論動(dòng)物體還是植物體，miRNA的生成途徑都是由莖環(huán)結構的前體切割成為成熟體；

序列的保守性：miRNA的序列在不同物種中的差距極小。

·特異性

miRNA的表達分布具有時(shí)間區別和空間區別。

時(shí)間的特異性：在個(gè)體不同的發(fā)育階段，miRNA的表達量不同；

空間的特異性：在個(gè)體的不同組織中，miRNA的表達量不同。

三、miRNA序列查找

常用的查找miRNA數據庫--miRBase和TarBase。

該數據庫提供已發(fā)表的miRNA序列，注釋查詢(xún)，定位，發(fā)卡序列以及命名服務(wù)等信息的數據庫。

該數據庫人工搜集了實(shí)驗驗證過(guò)的miRNA的靶基因，包括在人、小鼠、果蠅、蠕蟲(chóng)和斑馬魚(yú)中的miRNA的靶基因。

四、miRNA產(chǎn)品選擇指南

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