2×PAGE專(zhuān)用Taq PCR預混液(含染料)-核酸提取

2×PAGE專(zhuān)用Taq PCR預混液(含染料)-核酸提取

1. 產(chǎn)品描述：

信勵致和®2×PAGE專(zhuān)用Taq PCR預混液(含染料)包含Taq DNA 聚合酶、dNTPs以及優(yōu)化的緩沖體系，濃度為2×，使用時(shí)只需取適量 2×PAGE 專(zhuān)用 Taq PCR 預混液(含染料)，加入模板和引物，并加入ddH2O 補足體積，使PCR Mix 溶液濃度為1×即可進(jìn)行反應。適用于常規PCR及較短DNA片段的PCR擴增，專(zhuān)用于聚丙烯酰胺電泳檢測。

2. 產(chǎn)品特點(diǎn)：

（1）使用方便，僅需加?模板和引物即可進(jìn)行PCR擴增。

（2）快速、高效，減少加樣步驟，節約時(shí)間，可有效降低污染和加樣錯誤風(fēng)險。

（3）組分中包含染料，擴增產(chǎn)物可直接用于電泳檢測

2×PAGE專(zhuān)用Taq PCR預混液(含染料)-核酸提取

使用說(shuō)明

1. 產(chǎn)品組分：

2. 儲運條件：

-25~-15 ℃保存12個(gè)月。干冰運輸。

3. 注意事項：

（1）試劑于冰上溶解。

（2）避免試劑反復凍融。

常見(jiàn)問(wèn)題：

1. 擴增產(chǎn)物沒(méi)有或很少？

原因分析：模板濃度過(guò)低；實(shí)驗樣品DNA損傷或降解；PCR條件未優(yōu)化；退火溫度過(guò)高；延伸時(shí)間太短；循環(huán)次數太少；引物設計不完善；引物濃度過(guò)低；Mg2+濃度未優(yōu)化；模板質(zhì)量太差。

解決方案：建議DNA樣品不要反復凍融，以免造成DNA的損失；優(yōu)化PCR條件，對于基因片段較長(cháng)的片段適當增加延伸時(shí)間，增加循環(huán)數。

2. 出現非特異性擴增？

原因分析：引起該現象的主要原因有引物濃度未優(yōu)化或者引物降解；退火溫度過(guò)低；引物特異性低；擴增循環(huán)數過(guò)多。

解決方案：建議將引物置于4℃或者-20℃保存；適當提高退火溫度；設計特異性高的引物；擴增循環(huán)數不宜超過(guò)35。

3. 陰性對照出現空白條帶？

原因分析：陰性對照出現條帶一般有三個(gè)較為常見(jiàn)的原因，分別是引物特異性較低、PCR體系存在污染、電泳時(shí)上樣量過(guò)多導致陰性對照的膠孔飄進(jìn)去了樣品。

解決方案：重新設計高特異性引物，并BLAST檢測引物特異性；重新配置PCR反應體系；上樣時(shí)避免過(guò)多，手不要抖。

4. 電泳膠圖出現拖尾彌散？

原因分析：配置PCR體系時(shí)DNA聚合酶加入量過(guò)多，酶的本質(zhì)是蛋白質(zhì)，酶量較多會(huì )產(chǎn)生拖尾現象；PCR產(chǎn)物降解。

解決方案：建議根據反應體系的大小及產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)加入適量的酶；建議在獲得PCR后的產(chǎn)物即可進(jìn)行電泳，置于-20℃長(cháng)期儲存，盡量不要在常溫放置。